小鼠羧化不全骨鈣素（ucOC）ELISA試劑盒操作流程：
1. 從室溫平衡20min后的鋁箔袋中取出所需板條，剩余板條用自封袋密封放回4℃。
2. 設(shè)置標準品孔和樣本孔，標準品孔各加不同濃度的標準品50μL；
3. 樣本孔中加入待測樣本50μL；空白孔不加。
4. 除空白孔外，標準品孔和樣本孔中每孔加入辣根過氧化物酶（HRP）標記的檢測抗體100μL，用封板膜封住反應孔，37℃水浴鍋或恒溫箱溫育60min。
5. 棄去液體，吸水紙上拍干，每孔加滿洗滌液（350μL），靜置1min，甩去洗滌液，吸水紙上拍干，如此重復洗板5次（也可用洗板機洗板）。
6. 每孔加入底物A、B各50μL，37℃避光孵育15min。
7. 每孔加入終止液50μL，15min內(nèi)，在450nm波長處測定各孔的OD值。

為了減小過失，是先稀釋再加樣。而針對這位客戶所遇到的疑問，我公司技術(shù)人員是這樣說明的：
1. 前者測的是稀釋和移液的過失，后者只需移液過失。
2. 一般都是稀釋一次，分兩孔吧。同濃度的分復孔。
3. 由于是從同一原液稀釋，一般不考慮稀釋過失(稀釋過失是存在的)，都是稀釋到想要的倍數(shù)直接分孔(而不是逐個稀釋，這樣可以使稀釋過失減小)。
4. 復孔是為了掃除移液體積，板的影響，以及其他系統(tǒng)過失的，要求復孔的濃度是一起的。稀釋后分孔能滿意此要求，逐個稀釋不能。